RESUMO Este trabalho descreve as espécies do gênero Eimeria Schneider, 1875, que ocorreram em um confinamento de cordeiros, bem como as dinâmicas da eliminação de oocistos no ambiente, a correlação com o ganho de peso médio diário (GMD) e as variáveis climáticas, durante nove semanas. Cento e quatro cordeiros de diversas raças e cruzas, com aproximadamente 60 dias de vida, foram confinados e submetidos a pesagens e avaliações clínicas e coprológicas periódicas. Amostras de fezes com mais de 500 oocistos de Eimeria por grama de fezes (OoPG) foram separadas para esporulação e identificação das espécies. Entre os oocistos avaliados, foram identificadas as espécies: E. parva, E. crandallis, E. ovinoidalis, E. weybridgensis, E. bakuensis, E. marsica, E. ahsata, E. granulosa, E. pallida e E. faurei. Eimeria crandallis foi a mais frequente, presente em 44 das 58 amostras avaliadas, enquanto E. parva foi a mais abundante nas contagens individuais. Nenhum dos animais apresentou quadro de eimeriose, e coeficientes negativos foram encontrados nas correlações OoPG vs. GMD (-0,075) e OoPG vs. pluviosidade (-0,1164), enquanto para OoPG vs. temperatura foi encontrado coeficiente positivo (0,2914). Animais positivos para a eliminação de oocistos apresentaram infecção mista nas avaliações semanais, com até sete espécies parasitando um mesmo cordeiro.

ABSTRACT This study describes the Eimeria Schneider, 1875 species that occurred in a lamb feedlot, as well as the dynamics of oocyst output in the environment and its correlation with daily weight gain (DWG) and climatic variables during nine weeks. One hundred and four lambs of various breeds and crossbreeds, at approximately 60 days old, were placed in a feedlot and submitted to periodic weighing and clinical and coprological evaluations. Fecal samples presenting more than 500 Eimeria spp. oocysts per gram (OPG) were separated for sporulation, and oocysts were identified at species level. Among evaluated oocysts, the following species were identified: E. parva, E. crandallis, E. ovinoidalis, E. weybridgensis, E. bakuensis, E. marsica, E. ahsata, E. granulosa, E. pallida and E. faurei. Eimeria crandallis was the most frequent one, being identified in 44 of the 58 evaluated samples, while E. parva was the more abundant in individual counts in most weeks. None of the animals presented clinical signs of eimeriosis and negative correlation coefficients were found for OPG vs DWG (-0.075) and OPG vs rainfall, as for OPG vs temperature this coefficient was positive. Animals shedding oocysts presented mixed infection, with up to seven species parasitizing the same lamb.

RESUMO A criptosporidiose é uma importante zoonose que pode ser transmitida por meio de alimentos, água de bebida e por contato com animais e pessoas infectadas. Além disso, trata-se de uma enfermidade clínica ou subclínica frequente em diversas espécies de animais, incluindo coelhos domésticos. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de Cryptosporidium spp., realizar sua classificação molecular e relacionar a presença do parasito às diferentes fases de criação em 21 criações comerciais de coelhos, localizadas nos estados de Minas Gerais, Mato Grosso do Sul, Pernambuco, Paraná, Rio de Janeiro, Rio Grande do Sul e São Paulo. Quinhentas e catorze amostras de fezes foram colhidas e armazenadas em solução de dicromato de potássio 5%. Os oocistos foram purificados por centrífugo-flutuação em solução de Sheather e visualizados por microscopia, utilizando-se a coloração negativa com verde malaquita. Cinquenta e cinco amostras foram submetidas à reação em cadeia pela polimerase (nested PCR) e ao sequenciamento de fragmentos amplificados, referentes aos genes da subunidade 18S do rRNA e da glicloproteína GP60, visando à caracterização molecular de Cryptosporidium spp. Oito amostras foram positivas para Cryptosporidium spp. pela microscopia (1,56%; 8/514) e sete foram positivas pela nested PCR (12,73%; 7/55). Pela análise molecular, foi possível identificar Cryptosporidium cuniculus (18S rRNA) e C. cuniculus subtipo VbA21 (gp60) em coelhos jovens e em matrizes.

ABSTRACT Cryptosporidiosis is an important zoonotic disease that can be transmitted via water, food and contact with infected animals and people. Furthermore, clinical and subclinical disease occur in many animal species, including the domestic rabbit. The objective of this study was to determine the occurrence of Cryptosporidium spp., perform its molecular classification and correlate the presence of the parasite to the different animal categories in Brazilian rabbits farms. A total of 514 fecal samples from 21 rabbits farms located in the states of Minas Gerais, Mato Grosso do Sul, Pernambuco, Paraná, Rio de Janeiro, Rio Grande do Sul and São Paulo were collected and stored in 5% potassium dichromate. Fecal samples were purified by centrifugal-flotation in Sheather solution and screened for Cryptosporidium spp. oocysts using the negative malachite green staining. Aiming the molecular characterization of Cryptosporidium spp., nested PCR targeting the 18S rRNA gene and gp60 gene followed by sequencing of amplified fragments were accomplished in 55 samples. Eight samples were positive for Cryptosporidium spp. by microscopy (1.56%; 8/514) and seven samples were positive by PCR (12.73%; 7/55). Molecular analysis revealed Cryptosporidium cuniculus for the 18S rRNA gene and C. cuniculus subtype VbA21 for the gp60 gene in kits and does.

Devido à proximidade de criadores de ovinos com animais possivelmente doentes e/ou eliminando oocistos fecais no ambiente e pela acentuada patogenicidade em cordeiros o objetivo foi, determinar a ocorrência e caracterizar molecularmente a infecção por Cryptosporidium spp. em cordeiros na região Centro Sul do Estado de São Paulo, Brasil. Num total de 193 amostras de fezes foram coletadas de ovinos de diversas raças, machos e fêmeas, com idade de até um ano. Por meio da reação em cadeia da polimerase (nested PCR) para a amplificação de fragmentos de DNA a partir do gene da subunidade 18S do rRNA houve positividade de 15% e o sequenciamento dos fragmentos amplificados foi possível em 19 amostras. A análise das sequências obtidas mostraram que as espécies identificadas nesses animais foram Cryptosporidium xiaoi em 15 amostras, sendo o primeiro estudo de caracterização molecular desta espécie de Cryptosporidium no Brasil. Cryptosporidium ubiquitum em três amostras, e Cryptosporidium meleagridis em uma amostra, sendo estas duas últimas consideradas espécies zoonóticas.

Considering the proximity of sheep farmers to animals that are possibly diseased or releasing fecal oocysts into the environment and the marked pathogenicity in lambs, the aim of this study was to determine the occurrence and to molecularly characterize the infection by Cryptosporidium spp. in lambs in the South Central region of the state of São Paulo, Brazil. A total of 193 fecal samples were collected from sheep of several breeds, males and females, aged up to one year. Polymerase chain reaction (nested-PCR) was used to amplify DNA fragments from the subunit 18S rRNA gene and indicated 15% positivity; sequencing of amplified fragments was possible for 19 samples. Analysis of the obtained sequences showed that the identified species were Cryptosporidium xiaoi for 15 samples, constituting thus the first molecular characterization study of this Cryptosporidium species in Brazil. Cryptosporidium ubiquitum was identified for three samples and Cryptosporidium meleagridis for one sample; the latter two are considered zoonotic species.

Chlamydophila psittaci é uma bactéria que causa doença respiratória ou sistêmica em aves e em seres humanos. Em vista do risco de transmissão para humanos, o objetivo deste estudo foi detectar a presença de Chlamydophila spp. em amostras de fezes ou suabes cloacais de aves assintomáticas. Foram colhidas 403 amostras fecais ou suabes cloacais, provenientes de aves domésticas, selvagens ou exóticas. As amostras foram submetidas à PCR em tempo real para C. psittaci, para amplificação de fragmento parcial do gene da subunidade 16S do rRNA, utilizando o SsoFastTM EvaGreen® Supermix (Bio-Rad) e análise da curva de dissociação. Para determinação do genótipo de C. psittaci, foi usada a hemi-nested PCR visando à amplificação de fragmento parcial do gene OMP-A, realizada nas amostras positivas pela PCR em tempo real, seguida de sequenciamento dos fragmentos amplificados. A PCR em tempo real revelou positividade em 17 (4,21%) amostras. A hemi-nested foi positiva em 2 amostras positivas pela PCR em tempo real. O genótipo A de C. psittaci foi identificado pelo sequenciamento de uma amostra amplificada pela hemi-nested PCR. Os resultados deste experimento demonstram que a PCR em tempo real, visando à amplificação de fragmento parcial da subunidade 16S do rRNA, seguida da análise da curva de dissociação, pode ser utilizada para detecção de DNA de Chlamydophila sp. em amostras fecais de aves assintomáticas. A classificação da espécie de Chlamydophila e do genótipo de C. psittaci deve ser realizada por meio de PCR tendo como alvo o gene ompA e sequenciamento dos fragmentos amplificados.

Chlamydophila psittaci is a bacterium that causes respiratory or systemic disease in birds and humans. Owing to the risk of transmission from asymptomatic birds to humans, the objective of this study was to detect the presence of Chlamydophila spp. in asymptomatic birds. Four hundred and three fecal samples or cloacal swabs were collected from domestic, wild or exotic birds. The 403 samples were examined by real time PCR specific for the 16S subunit of rRNA gene using SsoFastEvaGreen®SupermixTM (Bio-Rad) and melting curve analysis. Hemi-nested PCR specific for the OMP-A gene, accomplished in real-time PCR positive samples, was followed by sequencing of the amplified fragments to determine the genotype of C. psittaci. Real-time PCR was positive in 17 (4.21%) samples. Hemi-nested PCR revealed positivity in two samples previously positive by real-time PCR. Sequencing of the fragment amplified by hemi-nested PCR allowed for the identification of genotype A of C. psittaci in one sample. The results of this experiment show that the real-time PCR targeting the 16S rRNA gene followed by melting curve analysis can be used for diagnosis of Chlamydophila sp. in fecal samples of asymptomatic birds. The classification of the Chlamydophila species and the genotype of C. psittaci must be accomplished by PCR targeting the ompA gene and sequencing of the amplified fragments.

Relata-se um caso de ceratoconjuntivite causada por Encephalitozoon hellem em agapornis (Agapornis spp.) adultos, provenientes de um criatório comercial. Cinco animais apresentaram sinais clínicos de ceratoconjuntivite, blefaroespasmo e blefaroedema bilateral, com presença de secreção seropurulenta. Amostras fecais foram colhidas e foi realizado exame coproparasitológico, com resultado negativo. Dois animais foram necropsiados, sendo detectados, em impressões de raspado de conjuntiva ocular, esporos e outros estádios evolutivos de Microsporidium. A confirmação do diagnóstico foi feita pela reação em cadeia de polimerase e sequenciamento de fragmentos amplificados, com utilização de primers específicos para o gene da subunidade 18S do rRNA de E. hellem. A análise dos fragmentos amplificados demonstrou 100% de similaridade com outras sequências de E. hellem publicadas no GenBank. Este é primeiro relato de infecção por E. hellem em aves no Brasil.

A clinical case of keratoconjunctivitis by Encephalitozoon hellem in adult lovebirds (Agapornis spp.) from a commercial flock is reported. Five animals presented clinical symptoms of keratoconjunctivitis, blepharospasm, and bilateral blepharoedema, with seropurulent secretion. Coproparasitological diagnosis was carried out in fecal samples, with negative results. Two animals were necropsied, with detection of spores and other developmental stages of Microsporidium in conjunctival smears. The confirmation of the diagnosis was accomplished by the polimerase chain reaction with specific primers for 18S subunit of the rRNA of E. hellem, followed by sequencing of amplified fragments, which revealed 100% of genetic similarity to E. hellem. This study is the first report of E. hellem infection in birds in Brazil.